thin layer chromatography.

thin layer chromatography.

पेपर एवं TLC क्रोमैटोग्राफी द्वारा पौधों की पत्तियों में उपस्थित वर्णकों की पहचान तथा उनके Rf मान की गणना का M.Sc. स्तर का प्रैक्टिकल, सिद्धांत, विधि, प्रेक्षण, गणना और परिणाम सहित, ChemExplorers द्वारा प्रस्तुत।

पौधों की पत्तियों में उपस्थित वर्णकों (Pigments) की पहचान एवं पेपर / TLC क्रोमैटोग्राफी द्वारा Rf मान का निर्धारण

उद्देश्य

पौधों की हरी पत्तियों में उपस्थित विभिन्न वर्णकों (जैसे— क्लोरोफिल a, क्लोरोफिल b, कैरोटीन, ज़ैंथोफिल) की पहचान करना तथा पेपर क्रोमैटोग्राफी / थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी (TLC) की सहायता से उनके Retention Factor (Rf) मान का निर्धारण करना।

सिद्धांत (Theory – M.Sc. स्तर)

क्रोमैटोग्राफी एक पृथक्करण तकनीक है, जो विभिन्न अवयवों के स्थिर अवस्था (Stationary Phase) और गतिशील अवस्था (Mobile Phase) के प्रति आकर्षण में अंतर पर आधारित होती है।

पौधों की पत्तियों में उपस्थित वर्णक अलग-अलग ध्रुवीयता (Polarity) रखते हैं, इसलिए वे सॉल्वेंट के साथ अलग-अलग दूरी तय करते हैं।

Retention Factor (Rf) को निम्न सूत्र से व्यक्त किया जाता है:$$Rf = \frac{\text{वर्णक द्वारा तय की गई दूरी}}{\text{सॉल्वेंट फ्रंट द्वारा तय की गई दूरी}}$$Rf=सॉल्वेंट फ्रंट द्वारा तय की गई दूरीवर्णक द्वारा तय की गई दूरी​

आवश्यक रसायन

• ताज़ी हरी पत्तियाँ (पालक / घास)
• एसीटोन या पेट्रोलियम ईथर
• हेक्सेन : एसीटोन मिश्रण (Solvent system)
• सिलिका जेल TLC प्लेट / क्रोमैटोग्राफी पेपर

उपकरण

• मूसल एवं खरल
• TLC चैम्बर / बीकर
• केपिलरी ट्यूब
• स्केल
• पेंसिल
• फिल्टर पेपर

प्रयोग विधि (Procedure)

1. हरी पत्तियों को छोटे टुकड़ों में काटकर मूसल-खरल में एसीटोन के साथ अच्छी तरह पीसा गया।
2. प्राप्त हरे अर्क को फिल्टर कर लिया गया।
3. TLC प्लेट / क्रोमैटोग्राफी पेपर के निचले सिरे से लगभग 2 सेमी ऊपर एक पेंसिल से रेखा खींची गई।
4. केपिलरी ट्यूब की सहायता से अर्क का एक छोटा धब्बा रेखा पर लगाया गया।
5. प्लेट को सॉल्वेंट से भरे चैम्बर में सावधानीपूर्वक रखा गया।
6. जब सॉल्वेंट ऊपर तक पहुँच गया, तब प्लेट को बाहर निकालकर सुखाया गया।
7. विभिन्न रंगीन धब्बों को चिह्नित किया गया।

प्रेक्षण (Observation)

सॉल्वेंट फ्रंट द्वारा तय दूरी = 10.0 सेमी

गणना (Calculation)

$$Rf (\text{कैरोटीन}) = \frac{8.5}{10.0} = 0.85$$$$Rf (\text{ज़ैंथोफिल}) = \frac{6.2}{10.0} = 0.62$$$$Rf (\text{क्लोरोफिल a}) = \frac{5.1}{10.0} = 0.51$$ $$Rf (\text{क्लोरोफिल b}) = \frac{3.8}{10.0} = 0.38$$

परिणाम (Result)

पौधों की पत्तियों में निम्न वर्णक उपस्थित पाए गए:

• कैरोटीन
• ज़ैंथोफिल
• क्लोरोफिल a
• क्लोरोफिल b

तथा उनके Rf मान सफलतापूर्वक निर्धारित किए गए।

सावधानियाँ (Precautions)

1. धब्बा बहुत बड़ा नहीं होना चाहिए।
2. सॉल्वेंट लाइन प्रारंभिक रेखा से नीचे न जाए।
3. प्लेट को हाथ से न छुएँ।
4. चैम्बर को बंद रखकर प्रयोग करें।

वाइवा प्रश्न (Viva Questions)

1. Rf मान क्या दर्शाता है?
2. क्लोरोफिल a और b में क्या अंतर है?
3. TLC, पेपर क्रोमैटोग्राफी से बेहतर क्यों है?
4. सॉल्वेंट सिस्टम का चयन क्यों महत्वपूर्ण है?
5. कौन-सा वर्णक सबसे अधिक गैर-ध्रुवीय होता है?